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超声波粉碎仪在链霉菌超声破碎时的方法条件

发表时间:2016-12-23  |  点击率:2014
  超声波粉碎仪可储存5个控制模式。且有定时数字显示,输出能量由光条显示,0~100%连续可调,操作直观方便。超声波粉碎仪工作方式有间断和连续两种选择,间断工作时,脉冲宽度和间断时间可分别设定。超声波粉碎仪的工作时间可由数字定时器控制,达到预定时间自动转变为待机状态,定时范围1min~99min。超声波粉碎仪可人为自由控制工作和截止时间,使用灵活方便,适用于少量样品的处理工作。
  那么超声波粉碎仪在链霉菌超声破碎的,使用的方法条件是什么呢?
  前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。使用超声波粉碎仪进行超声破碎时采用的具体条件是:
  1、取细菌的24 h培养液于5 000 r/min下离心5 min收集菌体;
  2、用pH 7.5的Na2HPO-NaH2PO缓冲液洗涤3次,再用该缓冲液将菌体配成1:3的菌悬液.置于40 mL大塑料试管内;
  3、将大塑料试管置于冰浴中,采用超声波破碎(功率200 W,1/2”探头,破碎30 s,间歇30 S);
  4、破碎液于12 000 r/min下高速冷冻离心30 min,收集细胞碎片和上清液,超声破菌流程与上述基本一致,就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris-HCl,洗涤一次就可以。另外超声剂量随样品量、菌体改变比较大,功率可以到400-600w,超5s,停5s,冰浴,要加终浓度1 mM的PMSF。为确定合适的超声强度和次数,有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。放线菌属于原核生物系统进化树上的(G+C)摩尔百分含量(mol%)高的革兰氏阳性菌分枝类群。在做大肠杆菌超声时,采用的是400W超声波粉碎仪,超5停5的方法,效果不错,但是用在链霉菌上,似乎没什么效果,因为大肠杆菌式属于革兰氏阴性菌的。
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